本指導原則旨在指導注冊申請人對心肌肌鈣蛋白I/肌紅蛋白/肌酸激酶同工酶MB(以下簡稱“心梗三項”)檢測試劑盒(膠體金免疫層析法)注冊申報資料的準備及撰寫,同時也為技術審評部門對注冊申報資料的技術審評提供參考。

本指導原則是對心梗三項檢測試劑盒(膠體金免疫層析法)的一般要求,申請人應依據具體產品的特性對注冊申報資料的內容進行充實和細化,并依據產品特性確定其中的具體內容是否適用。

本指導原則是對申請人和審查人員的指導性文件,但不包括注冊審批所涉及的行政事項,亦不作為法規強制執行,如果有能夠滿足相關法規要求的其他方法,也可以采用,但需要提供詳細的研究資料和驗證資料,相關人員應在遵循相關法規的前提下使用本指導原則。

本指導原則是在現行法規和標準體系以及當前認知水平下制定的,隨著法規和標準的不斷完善,以及科學技術的不斷發展,本指導原則相關內容也將適時進行調整。

一、適用范圍

心梗三項檢測試劑盒(膠體金免疫層析法)是指利用膠體金免疫層析法對人血清、血漿、全血樣本的心梗三項指標(包括心肌肌鈣蛋白I、肌紅蛋白、肌酸激酶同工酶MB)進行體外定性分析的試劑盒,包括此三項指標的獨立檢測或任意組合產品。

從方法學考慮,本指導原則是指利用基于抗原抗體反應原理的膠體金免疫層析法對心梗三項進行檢測的體外診斷試劑,不適用于定量或半定量產品。

依據《體外診斷試劑注冊管理辦法》(國家食品藥品監督管理總局令第5號)(以下簡稱《辦法》)、《食品藥品監管總局關于印發體外診斷試劑分類子目錄的通知》(食藥監械管[2013]242號),心梗三項檢測試劑盒(膠體金免疫層析法)管理類別為Ⅱ類,分類代號為6840。

二、注冊申報資料要求

(一)綜述資料

綜述資料主要包括產品預期用途、產品描述、有關生物安全性的說明、研究結果的總結評價以及同類產品上市情況介紹等內容,應符合《辦法》和《國家食品藥品監督管理總局關于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準證明文件格式的公告》(國家食品藥品監督管理總局公告2014年第44號)的相關要求,下面著重介紹與心梗三項檢測試劑盒預期用途有關的臨床背景情況。

肌鈣蛋白(Troponin)由肌鈣蛋白I、T、C三亞基構成,它們和原肌球蛋白一起通過調節Ca2+對橫紋肌動蛋白ATP酶的活性來調節肌動蛋白和肌球蛋白相互作用。當心肌損傷后,心肌肌鈣蛋白復合物釋放到血液中,4-6小時后,可在血液中檢測到升高,且升高的肌鈣蛋白I能在血液中保持6-10天,提供了較長的檢測期。心肌肌鈣蛋白I(cTnI)具有高度的心肌特異性和靈敏度,所以已成為目前較理想的心肌梗死標志物。

肌紅蛋白(Myoglobin,Myo)是由一條肽鏈和一個血紅素輔基組成的結合蛋白,是肌肉內儲存氧的蛋白質。胸痛發作后最快2小時即可出現升高;嚴重的充血性心力衰竭和心臟外科手術病人,由于存在心肌損傷,所以也會升高。肌紅蛋白是診斷急性心肌梗塞的敏感指標,所以肌紅蛋白成為目前心肌梗死標志物之一。

肌酸激酶(Creatine Kinase,CK)有四種同工酶形式:肌肉型(MM)、腦型(BB)、雜化型(MB)和線粒體型(MiMi),其中MB型主要存在于心肌細胞中。心肌梗死時,肌酸激酶在發病6小時內升高,24小時達高峰,3-4日內恢復正常,其中肌酸激酶同工酶MB診斷特異性較高,所以其成為目前心肌梗死標志物之一。

Myo是診斷急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)的早期較佳指標,cTnI是診斷AMI的高特異性指標,CK-MB雖不如Myo早也不如cTnI敏感,但對AMI后早期再梗死的診斷有一定的價值。臨床證明任何單項檢測結果都有誤診和漏診的可能,聯合檢測則更有助于早期準確地診斷AMI。

注:應明確原材料中單抗的特異性要求,且內控品原料純度要求不低于90%,適用時應提交基質效應研究資料。

(二)主要原材料研究資料(如需提供)

主要原材料(包括抗原、抗體及其他主要原料)的選擇、制備、質量標準及實驗驗證研究資料;質控品的原料選擇、制備、定值過程及試驗資料等。

(三)主要生產工藝及反應體系的研究資料(如需提供)

1.主要生產工藝介紹,可以圖表方式表示;

2.反應原理(如雙抗體夾心法)介紹;

3.確定抗原抗體反應條件(溫度、時間、pH值等)研究資料;

4.樣品加樣方式及加樣量確定的研究資料;

5.其他:如基質液的選擇、樣本稀釋等;

(四)分析性能評估資料

申請人應提交在產品研制階段對試劑盒進行的所有性能驗證的研究資料,包括具體研究方法、試驗數據、統計方法等詳細資料。申請人應按以下要求提供體外診斷試劑性能評估資料:

1.申請人名稱;

2.性能評估方法、要求;

3.性能評估所使用試劑的名稱、批號、有效期;

4.如涉及,應提供使用的儀器型號、序列號(SN);

5.性能評估的時間、地點、檢驗人員;

6.性能評估的具體數據及分析判定;

7.性能評估審批人簽字、審批時間。

對于本試劑盒,建議著重對以下分析性能進行研究:

1.檢出限及重復性

檢出限是定性檢測試劑盒的一項關鍵指標,其濃度點的選擇應符合臨床實際診斷意義。為了避免在臨床應用時出現過多的“假陽性”結果,申請人在確定該產品的檢出限時應結合其實際的臨界值,建議不應把兩者濃度差設定的過大。在評價該項指標時,不但要驗證檢出限濃度點的陽性符合率情況,還要驗證陰性參考品的符合情況。

申請人應根據產品性能驗證的實際情況自行設置合理的企業內部參考品,應對內部陽性/陰性參考品的來源、抗體濃度等信息進行驗證。如申報產品有相應的國家標準品,建議使用其配制相應濃度質控品進行驗證。

2.分析特異性

(1)交叉反應

對抗原結構相近的物質進行交叉反應研究,如心肌肌鈣蛋白T、心肌肌鈣蛋白C、骨骼肌型肌鈣蛋白I、血紅蛋白、肌酸激酶同工酶CK-MM及CK-BB等。申請人應提交所有用于交叉反應驗證的抗原來源、濃度確認等信息。

(2)干擾物質

對樣本中常見的內源性干擾物質進行檢測,如溶血、高脂、黃疸、類風濕因子(RF)、抗核抗體(ANA)等。應對檢測項目陰性、弱陽性的臨床或模擬添加樣本分別進行驗證,說明樣本的制備方法及干擾實驗的評價標準,確定可接受的干擾物質極限濃度(結果應量化表示,禁用輕度、嚴重等模糊表述)。

3.Hook效應及樣本稀釋

Hook效應通常指在雙抗體夾心實驗中,由于標本中受檢抗原的含量過高,過量抗原分別與固相抗體和酶標抗體結合,而不再形成“夾心復合物”,從而影響檢測結果,將高濃度錯誤報告為低濃度,出現高濃度后帶現象,又稱“鉤狀效應”。

須采用高濃度樣本進行梯度稀釋后由低濃度至高濃度開始檢測,每個梯度重復3-5份,對鉤狀效應進行合理的驗證。建議在產品說明書上明示對鉤狀效應的研究結果。

過度稀釋可能改變基質效應,申請人應對樣本稀釋液、合理的稀釋比例進行相關研究以確認最佳稀釋條件。

4.其他需注意問題

試劑盒的樣本類型如包括血清、血漿和/或全血樣本,則應對三者之間進行相關性研究以確認不同類型樣本檢測結果是否完全一致或存在某種相關性(如系數關系)。對于血漿/全血樣本,申請人應對不同的抗凝劑進行研究以確認最適的抗凝條件以及是否會干擾檢測結果。

(五)陽性判斷值確定資料

應提交驗證陽性判斷值所采用樣本來源及詳細的試驗資料。

研究時,至少應包括正常人群組以及與心梗疾病易混淆的干擾組(如高血壓、糖尿病、腎臟疾病等),且應明確各組人群的篩選標準。應提交臨界值及灰區上下限(C95、C5)確定的詳細研究資料。

陽性判斷值研究結果應在說明書【陽性判斷值】項中進行相應說明。

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6 心梗三項檢測試劑盒注冊申報資料指導原則(征求意見稿).doc